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96T大鼠 （Rat） 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 （eNOS）ELISA試劑盒江西，南昌
發(fā)布時間： 2012-06-08 點擊次數(shù)： 1379次大鼠 （Rat） 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 （eNOS）ELISA試劑盒江西，南昌
本試劑僅供研究使用
大鼠 （Rat） 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 （eNOS）ELISA試劑盒江西，南昌
試驗原理：
eNOS試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知eNOS濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將eNOS和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中eNOS的濃度呈比例關(guān)系。
大鼠 （Rat） 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 （eNOS）ELISA試劑盒江西，南昌
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品：400umol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀
空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型
生物素標記的抗eNOS抗體1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型
洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋
底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型
自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1．試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1．標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
400 umol/L（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 umol/L（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 umol/L（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 umol/L（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 umol/L（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 umol/L（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 umol/L（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
標準品濃度（umol/L）
A400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F12.512.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的eNOS標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的eNOS含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-400umol/L
4、敏感度： 1.0 umol/L
A6393-25g4-Acetamidobenzaldehyde 4-乙酰氨基苯甲醛[122-85-0]25g
A6808-100gAcetamidophenol 4-乙酰氨基酚[103-90-2]100g
A6538-25gAcetovanillone 香草酮[498-02-2]25g
AB1111-1gAcetosyringone 乙酰丁香酮[2478-38-8]1g
A6596-25g4-Acetylbenzoic acid 4-乙酰基苯甲酸[586-89-0]25g
A1931-500mlAcetic Acid 乙酸[64-19-7]500ml
B2003-5gBrilliant yellow 燦爛黃[3051-11-4]5g
AB0028-25gAmpicillin, sodium salt 氨芐青霉素鈉[69-52-3]25g
A6793-4LAcetic Acid 乙酸[64-19-7]4L
A1132-500gAcetoacetaniline 乙酰基乙酰苯胺[102-01-2]500g
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