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ELISA中常見問題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
發(fā)布時間： 2017-09-08 點(diǎn)擊次數(shù)： 2432次研域生物推出ELISA試劑盒代測：ELISA中常見問題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
elisa實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的運(yùn)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對實(shí)驗(yàn)的檢測作用影響較大，如不留意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
1. 孵育
可能原因： ①孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*; ②孵育時刻人為延伸，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：①貼封片或加蓋; ②按說明過程嚴(yán)厲控制操作時刻。
2. 洗板
可能原因：①選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。②選用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量缺乏，導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板作用差。③反響板過多形成洗板等候時刻長。
解決辦法： ①確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; ②合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
3. 顯色
可能原因：①顯色劑制造后放置時刻過長或運(yùn)用過期顯色劑; ②加顯色劑時濺起孔外形成液體回流。
解決辦法：①顯色劑盡量在臨用前制造，堅(jiān)持不期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必;②加樣時保持顯色劑不外流; ③A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械。
4. 挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢測試劑，嚴(yán)厲依照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
5 加樣
可能原因：①血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣;②手藝操作中，加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);③加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺起孔外。
解決辦法：①標(biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次，放置一段時刻后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要儲存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。② 加樣后及時放入孵箱。③加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。④如果選用AT或其他全自動加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。⑤標(biāo)本較多時，請分批操作。
6. 停止
可能原因如加停止液時發(fā)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加停止液時應(yīng)防止發(fā)生氣泡。
7. 讀板
如讀板時板底不清潔等。應(yīng)確保酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA檢測規(guī)范自動化，有效進(jìn)步檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了挑選試劑外，有必要嚴(yán)厲依照操作過程進(jìn)行操作，一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以謹(jǐn)慎的工作作風(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才干確保檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有適當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動酶標(biāo)儀，這關(guān)于完成ELISA試劑盒規(guī)范化檢測、進(jìn)步檢測質(zhì)量起到了重要作用。